引言

膠原蛋白在醫(yī)療器械、醫(yī)用敷料及高端護(hù)膚等領(lǐng)域應(yīng)用前景廣闊，市場(chǎng)對(duì)高純度、高活性膠原蛋白的需求持續(xù)增長(zhǎng)。東富龍（300171）層析介質(zhì)以高動(dòng)態(tài)載量、優(yōu)異的化學(xué)穩(wěn)定性與規(guī)模化流穿性能為核心優(yōu)勢(shì)，為客戶提供從工藝開(kāi)發(fā)、中試放大到噸級(jí)生產(chǎn)的完整純化解決方案。截至目前，東富龍層析介質(zhì)已協(xié)助客戶完成多個(gè)重組膠原蛋白項(xiàng)目的工藝開(kāi)發(fā)，包括支持客戶完成2噸級(jí)規(guī)模化生產(chǎn)、實(shí)現(xiàn)5噸級(jí)產(chǎn)線落地等項(xiàng)目，其余多個(gè)項(xiàng)目均已進(jìn)入中試乃至規(guī)模化生產(chǎn)階段，覆蓋三類醫(yī)療器械、醫(yī)用敷料及化妝品等多類應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)。

東富龍層析介質(zhì)不僅為客戶實(shí)現(xiàn)純度高、宿主殘留低、批次穩(wěn)定的高質(zhì)量生產(chǎn)目標(biāo)，更通過(guò)持續(xù)的技術(shù)協(xié)同與工藝優(yōu)化，助力企業(yè)提升產(chǎn)品競(jìng)爭(zhēng)力、加速產(chǎn)業(yè)化進(jìn)程，持續(xù)推動(dòng)膠原蛋白行業(yè)向規(guī)范化、規(guī)模化與高附加值方向發(fā)展。膠原蛋白純化工藝耗材解決方案可回顧推文：【東東工藝指南】膠原蛋白純化（上）；【東東工藝指南】膠原蛋白純化（下）。

【資料圖】

膠原蛋白純化商業(yè)化案例分享

動(dòng)物組織來(lái)源膠原蛋白

本案例為動(dòng)物組織中提取并純化膠原蛋白，采用東富龍TanFlux Ⅱ微濾膜包進(jìn)行澄清過(guò)濾去除雜質(zhì)，CM Purose 6FF陽(yáng)離子交換層析進(jìn)行精細(xì)純化，層析圖譜顯示，目標(biāo)蛋白在洗脫峰中富集效果顯著，流穿部分中目標(biāo)蛋白含量較低。最后采用東富龍TanFlux Ⅱ超濾膜包進(jìn)行料液濃縮與脫鹽，實(shí)現(xiàn)了從復(fù)雜動(dòng)物組織提取液中高效純化膠原蛋白。最終產(chǎn)物純度較高，工藝步驟簡(jiǎn)潔，具備良好的可放大性和生產(chǎn)適用性，適用于動(dòng)物源膠原蛋白的規(guī)模化制備。

圖1. CM Purose 6FF層析圖譜（左）；SDS-PAGE純度圖（右）

表1. CM Purose 6FF產(chǎn)品信息

谷氨酸棒狀桿菌表達(dá)-Ⅲ型膠原蛋白（His 標(biāo)簽）

該案例為谷氨酸棒狀桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的膠原蛋白，蛋白由谷氨酸棒狀桿菌分泌至胞外發(fā)酵液中，簡(jiǎn)化了下游純化的初始步驟。料液離心澄清后，精純步驟采用 Ni Purose 6FF鎳離子螯合親和層析介質(zhì)進(jìn)行高效純化，該介質(zhì)具有鎳離子泄漏量低、性能穩(wěn)定、動(dòng)態(tài)結(jié)合容量高的特點(diǎn)，確保了工藝在規(guī)模化生產(chǎn)中的穩(wěn)定性與經(jīng)濟(jì)性。終產(chǎn)品HPLC純度圖顯示最終產(chǎn)品純度96.73%、收率80%，滿足工業(yè)化生產(chǎn)對(duì)重組III型膠原蛋白純度、收率與安全性的要求。

圖2. Ni Purose 6FF層析圖譜

圖3. 終產(chǎn)品HPLC純度圖（左）；

終產(chǎn)品SDS-PAGE純度圖（右）

表2. Ni Purose 6FF 產(chǎn)品信息

畢赤酵母表達(dá)-Ⅲ型膠原蛋白

該案例為畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的膠原蛋白，目標(biāo)蛋白由畢赤酵母分泌表達(dá)至發(fā)酵上清中，有利于下游純化的初步處理。料液經(jīng)過(guò)澄清、超濾濃縮處理后，采用Phenyl Purose 6FF（HS）高載量苯基疏水層析介質(zhì)進(jìn)行精純。該介質(zhì)具有高動(dòng)態(tài)結(jié)合載量、良好的化學(xué)穩(wěn)定性與機(jī)械強(qiáng)度，適合規(guī)模化生產(chǎn)。層析圖譜顯示，在約60%洗脫條件下目標(biāo)蛋白被有效洗脫，與約10%洗雜峰分離明顯，終產(chǎn)品HPLC純度圖顯示最終產(chǎn)品純度96.4%，收率65%，滿足工業(yè)化生產(chǎn)需求。

圖4. Phenyl Purose 6FF(HS) 層析圖譜

圖5. 終產(chǎn)品HPLC純度圖（左）；

終產(chǎn)品SDS-PAGE純度圖（右）

表3. Phenyl Purose 6FF(HS) 產(chǎn)品信息

CHO表達(dá)全長(zhǎng)三螺旋III型膠原蛋白

該案例為CHO表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的難溶性三螺旋膠原蛋白，料液經(jīng)過(guò)澄清處理后，在pH 3條件下使用SP Purose 6FF進(jìn)行陽(yáng)離子交換層析，該介質(zhì)載量高、穩(wěn)定性強(qiáng)、流速快、使用壽命長(zhǎng)，適用于蛋白的早期捕獲與粗純，在規(guī)模化生產(chǎn)中具有明顯的效率與經(jīng)濟(jì)性優(yōu)勢(shì)。數(shù)據(jù)顯示，不同洗脫組分（S2、S4、S6）均獲得高純度產(chǎn)品，其中純化效果最好的S2產(chǎn)量高、純度高達(dá)99.23%，SP Purose 6FF能夠穩(wěn)定地將目標(biāo)蛋白與雜質(zhì)分離，滿足規(guī)模化生產(chǎn)要求。

圖6. 不同組分終產(chǎn)品HPLC純度圖

表4. SP Purose 6FF 產(chǎn)品信息

結(jié)語(yǔ)

東富龍層析介質(zhì)在多類型膠原蛋白的純化工藝中表現(xiàn)卓越，充分展現(xiàn)了其在生物制藥下游純化領(lǐng)域的技術(shù)實(shí)力與產(chǎn)品可靠性。無(wú)論是動(dòng)物組織來(lái)源的天然膠原蛋白，還是通過(guò)微生物或哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)的重組膠原蛋白，東富龍?zhí)峁┑亩嘞盗袑游鼋橘|(zhì)均能針對(duì)不同膠原蛋白的理化特性，實(shí)現(xiàn)高效捕獲、精細(xì)分離與高回收率純化。未來(lái)，東富龍層析介質(zhì)將針對(duì)復(fù)雜結(jié)構(gòu)蛋白、融合蛋白等特殊產(chǎn)物開(kāi)發(fā)新一代高性能層析介質(zhì)，進(jìn)一步打破進(jìn)口依賴，為國(guó)內(nèi)生物制藥企業(yè)提供性能相當(dāng)、供應(yīng)穩(wěn)定、成本優(yōu)化的國(guó)產(chǎn)層析介質(zhì)選擇。